根據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)新型冠狀病毒核酸檢測(cè)工作手冊(cè)（試行第二版）》通知，“人群篩查應(yīng)選擇具有病毒滅活功能，如含胍鹽（異硫氰酸胍或鹽酸胍等）或表面活性劑的采樣管?！?/p>
滅活型病毒采樣管可高效滅活病毒，保護(hù)病毒核酸不被降解，且能在常溫下保存較長(zhǎng)時(shí)間，為樣品保存及運(yùn)輸節(jié)省成本。選擇滅活效果好的病毒采樣管，有助于確保后續(xù)核酸檢測(cè)質(zhì)量。
病毒采樣管滅活效果試驗(yàn)方法
參考《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002版）病毒滅活試驗(yàn)中描述的檢測(cè)方法，確定病毒保存管滅活能力。
步驟一：細(xì)胞培養(yǎng)
將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的HEK293T細(xì)胞消化計(jì)數(shù)后稀釋至1×104/mL，按照100μL/孔的體積，每個(gè)梯度的病毒做三個(gè)復(fù)孔，計(jì)算所需接種孔數(shù)，將細(xì)胞緩慢均勻接種至96孔板中。放入37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。
步驟二：慢病毒稀釋
將病毒滴度為107-108TU/mL的慢病毒按10倍梯度進(jìn)行稀釋，連續(xù)稀釋3個(gè)梯度。
步驟三：病毒滅活
把稀釋好的病毒置于室溫條件下，與滅活款病毒保存液（批號(hào)：220201/220207/220211）按1:1體積比進(jìn)行混合，置于室溫下分別放置1min、5min和10 min進(jìn)行滅活。
步驟四：終止滅活
采用病毒分離培養(yǎng)基（可用DMEM完全培養(yǎng)基替代）進(jìn)行1000倍稀釋以中和滅活保存液，終止滅活。
陰性對(duì)照：為病毒分離培養(yǎng)基對(duì)滅活款病毒保存液稀釋1000倍的混合液；
陽(yáng)性對(duì)照：為病毒分離培養(yǎng)基對(duì)病毒原液稀釋1000倍的混合液。
步驟五：病毒孵育
將事先培養(yǎng)的HEK293T細(xì)胞中吸棄細(xì)胞培養(yǎng)基，每孔加入100μL準(zhǔn)備好的病毒混合液，和對(duì)應(yīng)的陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照。病毒孵育3小時(shí)，每隔30分鐘從培養(yǎng)箱中取出晃動(dòng)一次。
步驟六：細(xì)胞培養(yǎng)
孵育結(jié)束后，將病毒液吸去，每孔中加入100μL DMEM完全培養(yǎng)基，將96孔板置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，并觀察細(xì)胞狀態(tài)。
步驟七：熒光細(xì)胞觀察與計(jì)數(shù)
繼續(xù)培養(yǎng)48-72h，期間觀察細(xì)胞狀態(tài)，若細(xì)胞培養(yǎng)液變黃，應(yīng)換液，對(duì)熒光細(xì)胞個(gè)數(shù)適量的孔進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算病毒滴度。
中科檢測(cè)提供病毒采樣管檢測(cè)服務(wù)，包括病毒采樣管滅活效果試驗(yàn)，為企業(yè)與原料廠商提供技術(shù)支撐，為社會(huì)防疫物資供應(yīng)提供保障。
