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　　利用細(xì)胞生物學(xué)方法經(jīng)顯微制片后在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)待測材料微核率的方法。這是普遍采用的基本方法，可以分為兩類：

 

　　1)將微核試驗(yàn)材料，在加人待測物質(zhì)的環(huán)境中培養(yǎng)一段時(shí)間，染色制片，顯微觀察計(jì)算微核率。

 

　　2)直接將受遺傳毒理損害生物的相應(yīng)材料制片，顯微觀察計(jì)算微核率。

 

 

　　1985年fenech等人建立的方法，用胞質(zhì)分裂阻滯劑阻斷胞質(zhì)分裂，但是不影響細(xì)胞核分裂，有絲分裂細(xì)胞呈特殊形態(tài)的雙核細(xì)胞，未發(fā)生核分裂的細(xì)胞則維持單核細(xì)胞形態(tài).檢測致突變因素作用后的雙核細(xì)胞率與雙核細(xì)胞微核率，可同時(shí)獲得致突變因素對細(xì)胞的遺傳毒性損害與對細(xì)胞周期影響的信息。

 

 

　　熒光原位雜交（Flu-orescenceinsituhybridization，F(xiàn)ISH)技術(shù)是近年來開展起來的分子生物學(xué)新技術(shù)。它是使用生物熒光素標(biāo)記的各類DNA和RNA探針與細(xì)胞或組織在玻片上進(jìn)行原位雜交，被觀察的特定DNA片段(或序列)在熒光顯微鏡下固定在細(xì)胞核或染色體的原有部位顯示熒光。

 

　　利用熒光原位雜交試驗(yàn)可以檢測是染色體斷裂還是染色體丟失，以及可以判斷是哪一條染色體，那一段所產(chǎn)生的微核。目前已成功用于MN實(shí)驗(yàn)的DNA探針主要有兩類：

 

　　第一類：是含DNA重復(fù)序列的探針，主要用于檢測染色體著絲粒的DNA。

 

　　第二類：是含染色體端粒DNA序列的探針，它主要顯示染色體臂的存在。

 

　　若兩種探針結(jié)合使用。則可以較為準(zhǔn)確地判MN的組成情況，即是染色體段片還是整條染色體，以及各自的數(shù)目。

 

　　目前，在原位雜交的基礎(chǔ)上又發(fā)展出了多彩色熒光原位雜交技術(shù)，它使用幾種不同的熒光素單獨(dú)或混合標(biāo)記的探針進(jìn)行原位雜交，在熒光顯微鏡下顯現(xiàn)不同的顏色，因而可以同時(shí)檢測間期或中期細(xì)胞中的幾個(gè)特異核酸序列。它能夠普遍應(yīng)用在物理圖譜繪制、致突變研究，腫瘤病理和產(chǎn)前診斷等方面。

 

 

　　抗著絲粒抗體(Anti一kinetochoreantibodies)是美國學(xué)者M(jìn)oroi及其同事于1980年在硬皮病病人血清中發(fā)現(xiàn)的一種自動(dòng)抗體，這些自動(dòng)抗體可以通過免疫熒光技術(shù)檢測到。他們與染色體著絲粒蛋白(抗原)成分相結(jié)合。具有較強(qiáng)的特異性。

 

　　但是并不全部硬皮病病人的血清中都含有該自動(dòng)抗體，含該抗體的病人皮膚損害往往并不嚴(yán)重和廣泛。但卻有顯著的CREST征。所以將用該種病人的血清對染色體著絲粒的染色直接稱為CREST染色(CRESTstaining)。CREST染色用來區(qū)分MN來源(染色體段片還是整條染色體)，了解誘導(dǎo)MN的化合物性質(zhì)(斷裂劑還是整倍體劑)。

 

 

 

　　流式細(xì)胞儀(Flowcytometry)檢測方法是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的定量測定細(xì)胞和亞細(xì)胞成分的方法。流式細(xì)胞儀是利用激光束為光源，將待測樣品進(jìn)行熒光染色，然后在液體載體里以單個(gè)細(xì)胞通過激光束，產(chǎn)生熒光信號并轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柾ㄟ^儀表顯示來達(dá)到定量測定的目的。流式細(xì)胞儀檢測MN有很多優(yōu)點(diǎn)：

 

　　1)檢測速度至少比人工讀片快40~100倍。

 

　　2)減少了人為的主觀因素。

 

　　3)新型流式細(xì)胞儀具有分選功能，對判定為含MN的細(xì)胞，可以分類檢出并收集在玻片上或試管里，在顯微鏡下檢查驗(yàn)證，以證實(shí)其真實(shí)性并計(jì)算其可置信度。

 

 

　　把高分辨力攝像機(jī)與計(jì)算機(jī)結(jié)合起來將圖像分解為若干點(diǎn)，這就是計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)。再將每個(gè)點(diǎn)的圖像色差轉(zhuǎn)換為數(shù)字信號，儲存在計(jì)算機(jī)里進(jìn)行各定量參數(shù)的計(jì)算。從80年代中期開始利用計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)，其檢測速度也至少比人工計(jì)算快10倍以上，但容易受條件因素影響，還需進(jìn)一步完善。

 

　　以上便是小編為大家總結(jié)的微核試驗(yàn)的種類，一共分為五大類。還想要了解更多毒理檢測的項(xiàng)目請前往中科檢測官網(wǎng)。作為擁有嚴(yán)格質(zhì)量管控體系，確保檢測報(bào)告的科學(xué)性和權(quán)威性的第三方檢測機(jī)構(gòu)——中科檢測，為全國范圍內(nèi)的用戶便捷的服務(wù)，滿足市場日益增加的檢測需求。